ІГХ дослідження - що це таке, розшифровка результатів

В даний час якісна діагностика багатьох онкологічних захворювань неможлива без проведення імуногістохімічного дослідження. Імуногістохімічне дослідження (ІГХ дослідження) - це метод мікроскопічного дослідження тканин. У процесі ІГХ дослідження зрізи тканин обробляються маркованими специфічними антитілами до виявленої речовини.

Це високоточний та інформативний метод, що дозволяє не тільки виявити новоутворення, а й розробити оптимальну тактику лікування.

ІГХ обов'язково призначають при раку лімфатичної системи, коли вражаються лімфатичні вузли або внутрішні органи.

ІГХ дослідження - що це таке

ІГХ являє собою методику, використовувану в патологічній анатомії для діагностики ракових і доброякісних пухлин. Його призначають, коли встановити точний діагноз стандартним гістологічним способом неможливо або необхідна деталізація клінічно значущих параметрів новоутворень на молекулярному рівні.

Дуже часто гістології буває недостатньо. У більшості випадків причиною цього є вкрай нетипова структура патологічної освіти, що суттєво ускладнює постановку точного діагнозу. Зокрема, при лімфомі і лейкозі ІГХ роблять практично завжди.

Потрібно відзначити, що всього налічується близько 70 різновидів лейкозів і лімфом. Верифікувати деякі з них вдається лише шляхом декількох досліджень - гістологічного, імуногістохімічного і молекулярно-генетичного.

Ще один діагноз - «дрібнокруглоклітинна пухлина» - може означати 13 злоякісних утворень, що мають різний перебіг і прогноз. Крім того, кожне з них вимагає розробки особливої схеми хіміо- і радіотерапії. Диференціювати такі пухлини допомагає єдиний метод - імуногістохімія.

Суть методики

При розвитку будь-якого пухлинного процесу формуються чужорідні організму білки - антигени, на противагу яким імунна система людини виробляє антитіла - імуноглобуліни. Вони прикріплюються до антигенів і зв'язуються з епітопами - основними частинами антигенних макромолекул. Антитіла виконують відразу дві функції: зв'язувальну і ефекторну. Простіше кажучи, вони безпосередньо заважають антигенам завдавати шкоди і одночасно активують комплемент, запускаючи відповідну реакцію імунітету.

Роль антигенів в даному випадку належить атиповим пухлинним клітинам. Перед тим як провести імуногістохімічне дослідження, зрізи біометаріалу маркуються специфічними антитілами до них. З метою подальшої візуалізації ці антитіла фарбуються ферментами. Далі, використовуючи високоточну оптику, спостерігають за поведінкою випробовуваних клітин.

Якщо білкові сполуки, позначені як антитіла, пов'язуються з пухлинними клітинами, буде видно світіння - флюоресценцію, що свідчить про наявність шуканих речовин. Так виявляють, наприклад, рецептори до гормонів і онкомаркери. При підозрі на рак молочної залози таким чином виявляються рецептори до естрогену і прогестерону.

Кому показано

Основним показом до призначення імуногістохімії є злоякісні новоутворення. В онкології даний метод застосовується для пошуку метастазів і патологічних мікроорганізмів, визначення виду і локалізації пухлини, а також з метою оцінки активності патологічного процесу. За допомогою ІГХ можна встановити остаточний або, рідше, проміжний діагноз при раку шкіри (меланомі), саркомі, лімфогранулематозі, лімфолейкозі та лейкозі, типувати ступінь злоякісності процесу. Останнє вкрай важливо при нейроендокринних утвореннях, які ще називають «прихованими вбивцями» через те, що їх дуже важко розпізнати на ранніх стадіях.

Імуногистохімічне дослідження часто проводять для того, щоб уникнути призначення агресивного лікування токсичними препаратами

В окремих випадках імуногістохімічний аналіз дозволяє встановити джерело метастазів, коли локалізація первинного вогнища невідома, а також провести диференційну діагностику при декількох новоутвореннях різного походження.

ІГХ може призначатися при безплідді, хронічних патологіях ендометрія, матки і яєчників, звичних викидах. Її доцільно робити і в тому випадку, якщо вагітність не настає після декількох процедур ЕКО.

Імуногистохімія допоможе виявити наявність клітин, що перешкоджають зачаттю, і визначити подальшу тактику лікування безпліддя.

Методом ІГХ оцінюють і лікарську чутливість шляхом виявлення:

• рецепторів статевих гормонів - естрогену, прогестерону та андрогенів. Необхідно при ураженні жіночої репродуктивної системи;
• фактора зростання пухлини Her2/neu. Біомаркер і терапевтична мішень агресивних типів раку грудей;
• соматостатинових рецепторів 2а та 5 типу, важливих при карциноїдах;
• мембранного білка імуноглобулінів PD-L1, гена ALK і рецептора тирозінкінази ROS. Дані показники досліджуються переважно при немелкоклітинному раку легенів;
• мікросателітної нестабільності;
• індексу проліферативної активності.

Важко переоцінити важливість мікросателітної нестабільності (MSI), яка суттєво розширює прогностичні та лікувальні можливості у пацієнтів зі злоякісними ураженнями ЖКТ. Новоутворення з низькою MSI повільніше ростуть і рідше дають метастази. Тому своєчасне виявлення MSI дозволяє уникнути призначення агресивної, але свідомо неефективної терапії.

Як проводяться ІГХ дослідження

Для виконання ІГХ необхідний біоматеріал, паркан якого здійснюється в основному шляхом взяття біопсії. Дещо рідше його отримують в ході ендоскопічної або класичної відкритої операції. Спосіб вилучення ураженої тканини залежить від типу і локалізації раку. При цьому слід врахувати, що брати матеріал на аналіз слід до початку терапії. В іншому випадку можливе спотворення результатів дослідження.

Етапи проведення аналізу:

1. Отриманий біоматеріал фіксують, обробляючи у формаліні, і відправляють у лабораторію.
2. Потім його знежирюють і піддають повторній фіксації, після чого заливають парафіном.
3. Далі проводиться мікротомування - з готових парафінових блоків робляться тонкі зрізи, які поміщаються на спеціальні шибки. Товщина зрізу становить не більше 1 мкм.

Для паркану матеріалу призначають біопсію пухлини або вилучають фрагмент тканини під час оперативного втручання.

Коли тканини лежать на склах, їх обробляють маркованими специфічними антитілами до виявленої речовини, яка в даній ситуації служить антигеном. Кількість їх видів обмежена кількома десятками. Дослідження реакцій із застосуванням до 5 різних антитіл проводиться на малій панелі. При більш масштабному експерименті потрібна велика панель.

Завершальним етапом аналізу є саме імуногістохімічне дослідження, що є методом мікроскопічного дослідження тканин. Цей метод забезпечує найбільш ефективне виявлення в зрізах тканин шуканих речовин.

Під час ІГХ рак будь-якого органу проявляється ефектом світіння - флюоресценції, - завдяки чому виявляються злоякісні клітини, визначаються рецептори гормонів або інші задані параметри.

Розшифрування

Вивченням зрізів біоматеріалу займаються лікарі-патологоанатоми. Вони ж першими складають прогноз, виходячи з виявленого типу і обсягу онкогенних клітин. При розшифровці результатів особливу увагу звертають на показник К-67 - специфічний білок, антиген ракового процесу. Він виробляється тільки при активному поділі клітин, а в стані спокою не продукується.

К-67 - це саме той онкомаркер, що показує ступінь озлокашення процесу. Якщо його рівень у відсотковому утриманні становить 85% і вище, то захворювання прогресує стрімко і з високою ймовірністю незабаром призведе до смерті.

Сприятливим буде прогноз при К-67 = 10%. У разі грамотно складеного плану терапії є всі шанси на повне одужання, часто без ризику рецидиву. При К = 30% констатують середній ступінь тяжкості хвороби, що означає досить швидкий ріст раку. За допомогою курсової хіміотерапії його можна уповільнити і навіть зупинити.

Однак К-67 - це не єдиний показник, який вказується в медичному висновку. Також записуються антитіла, до яких виявлено відповідні антигени, тип і кількість останніх.

Отриманий висновок лікар-патологоанатом передає лікуючому онкологу, який підбирає лікування. Для оцінки його ефективності імуногістохімію проводять ще раз після завершення терапевтичного курсу.

Відео

Читайте далі: ПГД ембріона

Фото: © Depositphotos